不同的生物样本适宜储存的温度一样吗？

生物样本库是一种集中保存各种人类生物的材料，主要用于疾病的临床治疗和生命科学研究的生物应用系统。人类生物材料包括生物大分子（DNA、RNA、蛋白质等）、细胞、组织和器官等样本。

近年来，生物样本库发展迅速，保存的人体样本多达几十种，而各个样本库并没有采用统一标准的低温保存技术和方法，在长期的储存过程中，可能造成所需要的样本信息发生变化。所以，在研究低温保存机制的基础上，选择合适的低温保存剂、升降温速率等方法处理样本后，储存在合理的温度环境中，是保证生物样本长期保存质量的关键。

那么如何选择适合自己样本的存储温度，不同的生物样本适宜储存的温度一样吗？

一、储存温度对样本的影响：

生物样本的长期储存，通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应，以提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度为-80℃（超低温冰箱）、-140℃（液氮气相或深冷冰箱）及-196℃（液氮液相），温度越低样本的稳定保存时间越长。

二、不同温度对生物样本的影响和保护作用：

a、-60~0℃储存

此温度是水的结晶温度，容易对细胞和组织的微观结构造成损害，一般不使用这一温度来保存组织和细胞。且在组织样本内生物大分子受到细胞组织内多种因素的影响，稳定性有可能明显降低，所以通常样本库不使用-60~0℃作为储存温度。

b、-80℃储存

-80℃是较常用的样本保存温度，也是常用超低温冰箱所能达到的温度。基于操作简便性、储存量和成本等因素来考量，这一温度也是目前保存样本中生物大分子活性的常用温度。

但对不同的生物大分子活性来说，这一温度下到底能保持多久的问题仍然处于研究探索中。组织中DNA的稳定性较好，可以在-80℃下保持数年或更长时间，但RNA则容易被广泛分布于细胞和各种组织里的RNA酶降解。RNA在稳定剂中的储存时间一般不超过5年。所以为长期保存RNA活性，建议使用更低的温度，或者利用小部分样本提取RNA与剩余样本同步储存。其他样本内的蛋白质和脂类等生物大分子在-80℃下也能保存，但时间长短不一，稳定性逐渐衰减。

c、-140℃储存

-140℃是低于水的玻璃化温度（-136℃），也是气相液氮罐和深冷冰箱所能达到的温度，样本在这一低温范围内生物学活动极大降低，是保存样本中细胞活性的理想温度。

d、-196℃储存

-196℃是液氮挥发的温度，所以只有液氮液相保存技术能达到此温度。样本内的生理、生化活动在此温度下基本停止，稳定性状的样本可以得到长期保存。液氮保存是长期保存样本内细胞活性、组织器官的复杂结构及活性的最有效方法，已广为接受与认可。

三、常见样本储存温度的选择：

不同的生物样本适宜储存的温度是不一样的，选择样本的储存温度应将样本的类型、预期储存的时间、样本中生物分子的特性、不同细胞的特性考虑在内。

a、固体组织样本的储存温度：

长期储存的新鲜冰冻组织和OCT包埋冰冻组织应储存于液氮中，冰冻组织切片或者用于DNA 和RNA 提取的冰冻组织应储存在-80℃。经过福尔马林固定的石蜡包埋组织及组织切片应储存在室温，在低于27℃的环境下，并控制虫患和湿度。

b、液体样本的储存温度：

对于液体样本，包括血液和尿液，样本里的各种成分应在储存前分离，使得每一种成分能够在最佳条件下储存。全血、血清、血凝块、非淋巴细胞和血浆样本应储存在-80℃。血沉棕黄层和白细胞应储存在液氮中。尿液应储存在-80℃或者液氮中。

c、细胞的储存温度：

长期保存的细胞系应储存在液氮中。气相液氮比液相液氮储存样本更好。虽然液相液氮的温度更低一些（-196℃），但气相液氮的温度（-150℃）仍在临界温度之下。对于需要但没有条件使用液氮保存的细胞样本，应至少储存-80℃环境中。

四、样本的冻存和取用：

样本储存在稳定的条件下，应避免反复冻融。样本反复冻融会加快生物大分子物质的降解，严重影响样本的质量。样本在冻存前，最好分装成小份样本再储存，可以避免不必要的反复冻融，一般够一次研究用量即可。

当需要冻融样本时，应按照标准流程确保样本的稳定性和质量。样本在冻存过程中应采用合适的冷却速度，控制冰晶大小，以及冰晶形成速度，这些将影响到样本的质量。

样本使用时，需要采取必要的融化和复苏。储存的温度越低，复苏和融化所需的时间越长。当从冷冻状态中解冻时，最好的方式是37℃水浴，过程不宜太长，避免损害样本的生物活性。